Медицински факултет / Faculty of Medicine

Трајни URI за ову колекцију

https://repozitorijum.ues.rs.ba/handle/123456789/29

Потражи

Прегледај Медицински факултет / Faculty of Medicine по Аутор "Сара Ракочевић"
  • Ставка
    Aнти-инфламаторна и имуномодулаторна својства дапсона на хуманим ћелијама периферне крви, in vitro/
    (Универзитет у Источном Сарајеву, Медицински факултет Фоча, 2025) Сара Ракочевић
    Дапсон је хемијски аналог сулфапиридина, синтетисан почетком XX века. Због свог бактериостатског дејства, првобитно је коришћен као антибиотик. Као антагониста пара-аминобензоичне киселине, дапсон инхибира синтезу дихидрофолне киселине, која је неопходна за раст бактерија. Већ деценијама се користи као терапија првог избора у лечењу лепре. Такође, примењује се у лечењу инфекција Pneumocystis jirovecii и Toxoplasma gondii код пацијената са AIDS-ом. Дапсон је такође показан као ефикасан антималарик. Недуго након његовог увођења у клиничку праксу, уочена су и његова анти-инфламаторна својства. Као анти-инфламаторни агенс, дапсон се користи у лечењу хроничних запаљенских обољења коже, познатих као неутрофилне дерматозе, које се карактеришу прекомерном инфилтрацијом неутрофилних и еозинофилних гранулоцита. Поред тога, користи се као допунска терапија за лечење других кожних и системских обољења. Међутим, и даље не постоје убедљиви докази о утицају дапсона на адаптивни имунски одговор. Доступна сазнања о анти-инфламаторним својствима дапсона су оскудна, што отежава потпуно разумевање терапијског одговора код пацијената оболелих од неутрофилних дерматоза. Разјашњење непотпуне слике о утицају дапсона на функцију неутрофилних гранулоцита, као и на ћелије адаптивног имунског одговора, представља основни научни проблем овог истраживачког пројекта. Циљеви истраживања ове докторске дисертације били су да се испита цитотоксичност дапсона на моделу хуманих неутрофилних гранулоцита и дендритских ћелија моноцитног порекла (moDC) периферне крви, као и ефекат нетоксичних доза дапсона на функционалне и фенотипске карактеристике неутрофилних гранулоцита и moDC. У истраживању су коришћени неутрофилни гранулоцити периферне крви и moDC добровољних даваоца. За добијање дендритских ћелија моноцитног порекла (moDCs) примењен је протокол базиран на факторима стимулације гранулоцитних/макрофагних колонија (GM-CSF) и интерлеукина (IL-4). Цитотоксичност дапсона на овим ћелијским моделима утврђена је методом проточне цитометрије. Продукција слободних радикала кисеоника одређена је методом хемилуминисценције луминола код неутрофилних гранулоцита стимулисаних са форбол-12-миристат-13-ацетатом (PMA), N-формилметионин леуцин фенилаланин (fMLP), калцијум јонофор (CaI) и цитокинима фактором некрозе тумора (TNF-α) алфа и интерлеукином 8 (IL-8), док је интензитет ослобађања ванћелијских неутрофилних замки (NETоза) мерен методом флуоресценције боје SytoxGreen код PMA и CaI стимулисаних неутрофилних гранулоцита. Фенотипске карактеристике су утврђене методом проточне цитометрије код неутрофилних гранулоцита стимулисаних са fMLP и цитокинима (TNF-α и IL-8), moDC и ко-културама moDC и Т лимфоцита. (енгл. specific sandwich enyzmelinked immunosorbent assay) специфични сандвич имуносорбентни тест (ELISA) метода коришћена је за мерење продукције цитокина у културама неутрофилних гранулоцита и moDCs, као и у ко-културама moDCs и Т лимфоцита. Резултати показују да је дапсон инхибирао продукцију ROS-ова и IL-8 у културама неутрофилних гранулоцита стимулисаних са PMA, fMLP, CaI и цитокинима (TNF-α и IL-8), као и NETозу у културама неутрофилних гранулоцита стимулисаних са PMA и CaI. Такође, дапсон је смањио продукцију IL-8 у културама стимулисаним са fMLP и TNF-α + fMLP. Дапсон је такође снизио експресију површинских маркера: CD11b/CD18, CD66 и CD89, истовремено стимулишући експресију маркера CD16, CD32, CD62L, CD89 и CD181 на неутрофилним гранулоцитима, што доводи до смањења њихове активације и ефекторске функције при стимулацији са fMLP-ом и цитокинима (TNF-α и IL-8). На моделу незрелих moDC, диференцираних од моноцита у присуству GM-CSF и IL-4, дапсон је умањио експресију CD209. Дапсон је такође утицао на сазревање ових ћелија индукованих LPS/IFN-γ, инхибирајући експресију хемокинских рецептора CCR2 и CCR7 и ко-стимулаторног молекула CD86, као и експресију толерогених маркера (PD-L1, IDO-1, TGF-β и IL-10). У истом контексту, дапсон је смањио продукцију про-инфламаторних цитокина (TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-12 и IL-23), док је инхибирао продукцију анти-инфламаторног цитокина TGF-β и стимулисао продукцију IL-27. У ко-културама moDC и Т лимфоцита, moDC диференциране у присуству дапсона показале су смањен капацитет за поларизацију Th одговора у правцу Th1, Th2, Th17 и Treg ћелија, уз смањен капацитет за индукцију FoxP3+ Treg ћелија. Тиме се потврђује да дапсон има значајан утицај на функцију неутрофилних гранулоцита и дендритских ћелија моноцитног порекла, што указује на његове потенцијалне терапијске примене у лечењу запаљенских обољења и модулацији имунског одговора.